Charles Best est un physiologiste et biochimiste canadien.

Il est le fils de Luella Fisher et Herbert Huestis Best, médecin canadien originaire de Nouvelle-Ecosse.

Il s'inscrit en licence à l'University College de Toronto en 1915. En 1918, il s'engage comme volontaire dans l'armée canadienne et est affecté au 2e bataillon des blindés. Une fois démobilisé, il passe sa maîtrise de physiologie et biochimie.
A 22 ans, il travaille comme assistant au laboratoire du chirurgien Frederick Banting à l'Université de Toronto. Ils aboutissent ensemble dans ce cadre à la découverte de l'insuline, avec le concours du physiologiste J.J.R. Macleod et du biochimiste James Collip. Banting remporte le prix Nobel de médecine pour ces travaux, et partage sa récompense financière avec Best.
Best succède à Macleod à la chaire de physiologie de l'Université de Toronto en 1929.
Il est par la suite conseiller du Comité de Recherche Médicale de l'OMS.

Il est élu associé étranger de l'Académie nationale de médecine le 11 décembre 1945.
Il est docteur honoraire de l'Université Sorbonne de Paris, parmi d'autres université mondiales.
Il est le père de l'historien Henry Best et du généticien et homme politique Charles Alexander Best.